생물학 및 test(실험)
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작성일 20-10-05 20:31
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why
→ total protein양이 동일해야, 특정 protein 양의 상대적인 값을 비교할 수 있기 때문이다
2) enzyme activity를 측정(measurement)할 경우(enzyme-catalyzed reaction)
→ enzyme을 substrate에 처리한 후, 단위 시간당 substrate의 농도 감소를 통하여, enzyme activity를 측정(measurement)한다.
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Protein concentration determination
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단백질정량이란
시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정
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언제 단백질 정량을 하는가
wild type cell과 mutant cell 사이의 특정 protein양 발현에 차이 여부를 western blot을 이용해서 확인하고 싶을 경우
→ total protein 양을 단백질 정량을 이용해서 맞춰준다.
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생물학 및 test(실험)
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생물학 및 test(실험)
실험결과/생물의학
_SLIDE_1_
Protein concentration determination
_SLIDE_2_
단백질정량이란
시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정
_SLIDE_3_
언제 단백질 정량을 하는가
wild type cell과 mutant cell 사이의 특정 protein양 발현에 차이 여부를 western blot을 이용해서 확인하고 싶을 경우
→ total protein 양을 단백질 정량을 이용해서 맞춰준다.
why
→ total protein양이 동일해야, 특정 protein 양의 상대적인 값을 비교할 수 있기 때문이다
2) enzyme activity를 측정(measurement)할 경우(enzyme-catalyzed reaction)
→ enzyme을 substrate에 처리한 후, 단위 시간당 substrate의 농도 감소를 통하여, enzyme activity를 측정(measurement)한다.
_SLIDE_4_
단백질의 구조
_SLIDE_5_
단백질 정량 방법
UV spectrophotometry
Biuret method
BCA method
Lowry method
Bradford method
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UV spectrophotometry
방향족 아미노산인 phe, tyr, trp에 의한 280 nm
에서 최대 흡광을 이용한 방법.
-50 ug - 1 mg/ml 범위의 단백질양의 측정(measurement)이 가능
-빠르고 단백질 변성이 없음
- buffer, pH, Salt 등에 effect(영향) 을 많이 받음
-아미노산 조성에 따라 값이 달라짐.
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Biuret method
알칼리 조건하에서 Cu2+ ion이 단백질의 peptide
nitrogen에 결합하여, 보라색의 착화합물을 생성하
고, 540-560 nm에서 흡광을 나타내는 것을 이용한 …(skip)
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다.
